TGF—β2在骨髓纤维化患者骨髓组织中的检测分析

　　转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）可刺激血管增生、介导炎性反应、促进纤维细胞增殖以及胶原合成等。常见的3个亚型为：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3，本研究主要探索TGF-β2在骨髓纤维化中的表达特点。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料
　　30例确诊为继发性骨髓纤维化的骨髓组织标本设为实验组，均未接受放疗和化疗。正常对照组24例，为良性血液病无纤维化的骨髓活组织。样本均来自陕西中医学院第二附属医院血液病科门诊和住院的患者。
　　1.2实验试剂冷丙酮固定液，包埋剂甲液（甲基丙稀酸羟乙基酯单体、聚乙二醇、过氧化苯甲酰），包埋剂乙液（N-N二甲基苯甲胺、聚乙二醇）；TGF-β2抗体（由福州迈新生物技术有限公司提供）。
　　1.3标本制作方法
　　（1）取材：用骨髓活检穿刺针（3mm×25mm），在髂后或髂前上棘采取两步旋转进针法取出骨髓活组织标本。（2）固定：将骨髓组织用冷丙酮固定液，置于-20℃避光环境下固定8～24h。（3）浸泡：将固定之骨髓组织放入包埋剂甲液中，置-20℃避光环境下充分浸透8～24h。（4）包埋：按照甲液：乙液=40：1之
　　比例注入包埋盒内混匀，置于-20℃避光环境下待其凝固。（5）制片：制成2～3
　　μm组织切片，裱片于用稀释多聚-L-赖氨酸处理的载玻片上，吹干待用。（6）免疫组化染色：严格按照抗体应用说明进行。
　　1.4判断标准
　　TGF-β2定位于细胞质，在光学显微镜下观测，计数10个高倍视野下TGF-β2着色的细胞比例数，求出平均值，阳性细胞≤5%为阴性，阳性细胞>5%为阳性。
　　2结果
　　对实验组和对照组的骨髓活检组织进行塑料包埋，制备半薄切片后，进行免疫组化染色，检测骨髓组织中TGF-β2的表达，结果见表1。
　　行χ2检验，χ2=8.438，P<0.05，差异具有统计学意义，即骨髓纤维化患者骨髓组织中TGF-β2的表达低于正常对照组。
　　3讨论
　　骨髓纤维化的发病机制至今仍然存在争议，常见的原因包括：造血干细胞异常、免疫细胞异常以及各种细胞因子的异常。其中细胞因子在骨髓纤维化发生发展中的机制主要有：转化生长因子、血小板源性生长因子以及其他细胞因子的参与，如成纤维细胞因子在骨髓纤维化患者外周血中的巨核细胞以及血小板中呈高表达，是新生血管形成的诱导物，因此，可通过抑制成纤维细胞因子的表达进而抑制新生血管形成[1]。
　　TGF-β广泛存在于骨组织中，可由成骨细胞合成，以自分泌和旁分泌的形式调控成骨细胞增殖并诱导其分化[2]。TGF-β蛋白在酸性环境中可被激活，在巨核细胞和血小板中可检测到，激活后可刺激成纤维细胞合成胶原。TGF-β蛋白在慢性特发性骨髓纤维化患者的单核细胞、巨核细胞以及血小板中的表达增加。通过对继发性骨髓纤维化患者的研究发现：TGF-β在外周血以及骨髓组织中的表达均增高[3]，在体外实验中，利用源自患者的TGF-β蛋白刺激骨髓成纤维细胞，能产生较多的Ⅲ型前胶原和网硬蛋白，而Ⅰ型前胶原以及胶原的产生较少。关于TGF-β在骨髓纤维化胶原合成中的作用研究显示[4]：在骨髓纤维化动物模型中，促血小板生成素所诱导的骨髓纤维化需要TGF-β的参与。将TGF-β基因敲除小鼠以及未进行基因敲除的野生型小鼠的骨髓进行分离，用携带有促血小板生成素基因的慢病毒进行转染，移植到致死剂量照射小鼠上，结果显示：已进行骨髓移植的TGF-β基因敲除小鼠以及野生型小鼠的血小板水平均增高，并且都有骨髓增生综合征的表现。接受源自野生型小鼠骨髓移植的小鼠表现为严重的骨髓纤维化，网硬蛋白和胶原纤维增多，而接受源自TGF-β基因敲除小鼠骨髓移植的小鼠并未发现骨髓纤维化，并且未检测到TGF-β。由此可见，TGF-β在促进骨髓网硬蛋白的沉积中具有重要的调控作用，是骨髓纤维化发生发展中的关键调节分子。通过对TGF-β与骨髓纤维化的关系研究，可为临床靶向治疗提供依据，通过对系统性硬化病的小鸡模型研究[5]发现：TGF-β1具有促进纤维化作用，而TGF-β2和TGF-β3具有抑制纤维化作用，三种亚型之间的平衡调节对纤维化的形成具有重要作用，具体的调节机制还需进一步研究去证实。
　　参考文献：
　　[1]胡喜梅，周水阳，徐洪，等.沙利度胺治疗原发性骨髓纤维化临床疗效观察[J].中国药物与临床，2004，4（7）：507-509.
　　[2]魏义勇，石印玉.转移生长因子β调控成骨细胞的分子机制[J].中国中医骨伤科杂志，2003，11（5）：58-61.
　　[3]ShehataM，SchwarzmeierJD，HilgarthM，etal.TGF-beta1inducesbonemarrowreticulinfibrosisinhairycellleukemia[J].JClinInvest，2004，113（5）：676-685.
　　[4]ChagraouiH，KomuraE，TulliezM，etal.ProminentroleofTGF-beta1inthrombopoietin-inducedmyelofibrosisinmice[J].Blood，2002，100（10）：3495-3503.
　　[5]SgoncR，WickG.Pro-andanti-fibroticeffectsofTGF-betaInscleroderma[J].Rheumatology，2008，47（5）：5-7.

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