云南省中医药治疗艾滋病生物样本库的建立与管理

　　摘要：目的探讨中医药治疗艾滋病血液样本库的建库条件、样本的采集、保存、质量控制、生物安全以及信息化管理等问题。方法以云南省中医药治疗艾滋病试点项目为依托，针对纯中医药治疗1年以上、CD4升高、病毒载量降低或者持续稳定的患者作为样本拟捐赠对象，签署知情同意书，收集捐赠者血液标本，严格依照生物安全要求分离、分装，于液氮中低温冷冻保存，所有标本将采用信息管理软件规范管理，以备后续研究使用。结果已收集相关标本50余例，近300份，并将用于中医药有效治疗艾滋病的深入研究，结论艾滋病样本库的建立，有利于合理有效利用样本资源，便于深入研究中医药治疗艾滋病的作用靶点和特点，达到资源保存和共享的目的。

　　关键词：艾滋病血液样本库；建立与管理；生物安全

　　中图分类号：R512.91文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）09-0094-03

　　生物样本库（Biobank）也称生物信息库或生物材料和数据库，指的是长期保存的人体材料和样本，这些样本可与个人数据及有关它们供者的信息相联系或没有联系。人体组织的样本包括细胞、组织和血液以及作为遗传信息物质的DNA。经济合作与发展组织（OECD）定义为：生物样本库是一种集中保存各种人类生物材料（Human biological material），用于疾病的临床治疗和生命科学研究的生物应用系统。云南省是我国艾滋病的高发区，感染者具有多民族、多途径感染的特点，使云南省艾滋病感染者防治的研究颇具代表性。自2005年云南省中医药治疗艾滋病试点项目开展以来，截止2014年2月底，已累计治疗感染者11806例，正在治疗6791例。规范管理并长期保存依从性好、治疗有效的感染者标本，为我省、乃至全国科研工作者提供有价值的样本，是本院工作人员考虑的工作重点之一。本研究将以“珍惜样本、执行标准、充分应用、维护产权”为原则和宗旨[1]，初步建立云南省中医药治疗艾滋病生物样本库，并实施信息化管理。

　　1材料与方法

　　1.1材料海尔-80℃冰箱，金凤牌YDS-50B-125型液氮罐，贝克曼血球计数仪、生物安全柜、超净工作台、离心机、德国产2 mL冻存管，冻存管盒、淋巴细胞分离液、胎牛血清、DMSO、PBS、抗凝、促凝采血管，采血针等。

　　1.2标本的采集、分装

　　1.2.1全血：按照血液采集标准操作规程（下同），取2 mL抗凝全血直接分装于冻存管，1管/人。置入-20℃冰箱，过夜转入-80℃。

　　1.2.2血清、血浆、白细胞、红细胞分别取促凝管和抗凝管采4～6 mL全血，2200 rpm/min水平离心10 min，无菌移液器分别吸出血清、血浆、抗凝管中间白细胞层以及下层红细胞，分别装入冻存管中，1.5 mL/管，1～2管/人。

　　1.2.3外周血单核细胞（PBMC）离心后的抗凝全血，取血浆保存后，将剩余血细胞用PBS缓冲液按1：1等倍稀释，轻吹使其充分混匀后，缓缓加入有淋巴细胞分离液的离心管。加入时离心管倾斜45度角，用软吸管先浸润离心管壁，在距分离液上方1 cm处，使稀释液重叠于分层液之上（加入时勿破坏液面，并保持两界面清晰，勿冲破淋巴细胞分离液界面），水平离心机2200 rpm/min离心20 min，用无菌吸管吸取白细胞层，置另一15 mL离心管中，重复洗3次。血球计数仪计数细胞，加细胞冻存液保存于冻存管。

　　1.3样本保存所有保存样本依据编号规则确定唯一编号后，放入冻存盒置-20℃冰箱过夜，再转入-80℃，整理后放液氮罐长期保存。PBMC最好采用程序性降温盒降温后置液氮罐保存，可大大提高细胞冻存的存活率。

　　2结果

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