米曲霉GN—2菌株产中性蛋白酶固体发酵条件的优化(2)

　　3 结论与讨论

　　单因素试验表明，固体发酵的适合产酶条件为麸皮∶黄豆粉为 4∶1，发酵时间 60 h，培养温度25 ℃，培养基加水量10 mL，接种量2.0 mL孢子悬液，培养基起始pH 6.0，无机盐0.02%（NH4）2SO4 1 mL。正交试验结果表明，培养温度为25 ℃、加水量为20 mL、麸皮∶豆粉为4∶1、培养时间为72 h 的组合酶活力最高，达1 016.9 U/g。笔者在后续试验中采用该正交试验的优化条件，进行了3次发酵培养，结果酶活力均值为（993.6±14.62） U/g。说明经过优化，酶活力得到了提高。

　　中性蛋白酶可以从动植物组织中提取，也可以通过微生物生产。由于动植物资源受到各种条件的限制，不易扩大生产。而微生物具有生长快、种类多等优点，且微生物易变异，通过菌种改良可以进一步提高酶的产量，改善酶的生产和酶的性质，因此目前工业酶制剂大部分都是通过微生物发酵进行大规模制造的。可以生产蛋白酶的微生物有细菌、放线菌和真菌等。米曲霉可以生产多种酶，如淀粉酶、果胶酶、脂肪酶等，中性蛋白酶为其中的一种。米曲霉是一种常用的酶制剂生产菌种。本试验主要探讨了多种因素对米曲霉固体发酵产中性蛋白酶的影响，得到的试验结果与前人的研究结果[4，5]基本一致。但是若要应用于生产实践，需要根据具体情况选择合适的条件。

　　在生产中，若能够提高菌株的产酶能力，则可节约生产成本，获得较大的经济效益。当前，有研究者通过理化因子诱变或者基因工程技术对菌株进行改良处理，筛选得到一些产酶能力较高的菌株。由于诱变具有不定向性，因此这方面的研究有待进一步深入。

　　参考文献：

　　[1] 陈武勇，辜海兵，秦涛，等.中性蛋白酶水解铬革屑的研究[J].中国皮革，2001，30（21）：2-5.

　　[2] 李水泉，姚恕.中性蛋白酶发酵工艺优化研究[J].微生物学通报，1995，22（3）：154-155.

　　[3] 张敏，赵从，路福平，等.产中性蛋白酶菌株发酵条件的研究[J].食品研究与开发，2007（12）：44-48.

　　[4] 杨世平，邱德全.米曲霉产中性蛋白酶的适宜条件[J].湛江海洋大学学报，2005（3）：47-51.

　　[5] 苏龙，陈显玲，李家洲.米曲霉固体发酵生产中性蛋白酶产酶条件研究[J].玉林师范学院学报，2006，27（5）：86-89.

　　[6] 吴继星，陈在饵，张志刚.苏云金杆菌WG-001工程菌发酵培养基的筛选[J].微生物学杂志，2005，25（3）：91-94.

　　[7] 肖怀秋，林亲录，李玉珍，等.产中性蛋白酶B4发酵条件的研究[J].食品与生物技术，2004，20（5）：23-25.

　　[8] 天津轻工业学院，大连轻工业学院，无锡轻工业学院.工业发酵分析[M].北京：中国轻工业出版社，1986.

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