吴茱萸致小鼠肝毒性分子机制研究(2)

　　2.4 统计学分析数据以±s表示，使用SPSS 13.0软件进行统计处理，组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为有统计学意义。

　　3 结果

　　3.1 吴茱萸对小鼠肝脏指数的影响解剖肉眼观察主要脏器，对照组小鼠无明显异常;给予吴茱萸提取物15 d后，给药组小鼠肝脏指数较对照组显著增加（P<0.05），见表1。

　　3.2 吴茱萸对小鼠血液生化学影响药后15 d吴茱萸给药组ALT升高，吴茱萸醇提物组与对照比较有显著性差异（P<0.01）;吴茱萸醇提物组TG较正常对照组升高（P<0.05），见表2。

　　3.3 吴茱萸对肝脏的病理学影响光镜下组织病理学检查发现，吴茱萸水提物组可见肝细胞胞浆显疏松，肝腺泡三带（小叶下静脉周围）可见灶性坏死;肝腺泡三带（小叶下静脉周围）可见多个灶性坏死。吴茱萸醇提物组可见中央静脉周围片肝细胞块状变性、坏死，见图1。

　　3.4 吴茱萸Western blot实验吴茱萸水提取物和醇提取物使CK1e、磷酸化Erk1/2和CDK8蛋白表达量上调（P<0.01）;磷酸化Stat3和Src蛋白表达量下调（P<0.01），见图2。

　　4 讨论

　　前期研究发现吴茱萸可导致肝脏损伤[2-7]，在此基础上探究了吴茱萸肝脏毒性的分子标记物，采用多肽芯片技术，共获得809个由抗体芯片检测获得的结果，最后分析获得以下信号转导分子可能与吴茱萸肝脏毒性有关：Src，CDK8，CK1e，Erk1/2和Stat3。本研究采用蛋白印迹即Western blot分析方法，对多肽芯片的结果进一步验证发现吴茱萸可致小鼠肝脏Erk，CDK8，CK1e蛋白表达量上调及stat3，Src蛋白表达量下调。

　　Erk1/2是TGFbeta-Ras-Erk1/2-Smad以及mTOR信号通路中的关键点分子，介导细胞一系列的应答，通过对这2条信号通路的影响，介导细胞炎症和细胞凋亡关联的转录调节因子，如孟民杰[9]研究发现Kupffer细胞Erk1/2蛋白的高表达和磷酸化Erk1/2蛋白高表达可能参与并促进了脂肪性肝损伤。赵婷等[10]进一步研究发现活化Erk1/2诱导细胞产生TNF-α，后者是肝脏免疫性损伤的重要分子。CDK8（周期素蛋白依赖激酶8）是CDK家族的一个成员，定位于13ql2，CDK8与Cyclin C，MDE12，MED13组成CDK8组件（CDKS module）。其主要在基因转录过程中发挥重要作用。CDK8的过表达能正向促进β-catenin的表达，并通过调控WNT/β-catenin通路，可能与细胞凋亡有关。最近研究报道：CDK8的失调和一些人类癌症存在相关性，并被认为是癌蛋白[11-12]。Stat3是JAK2/ IL-6/Stat3信号通路的关键调控基因，参与众多基因转录调节，并能影响细胞增殖侵袭活性[13]。此外，王珺平等[14]报道：Stat3参与IL-10抗炎性反应，通过IL-10R和JAK1的活化启动胞核内特异的DNA转录，发挥抗炎症作用。据此，推断由于本实验中吴茱萸抑制Stat3的活性，抑制了抗炎细胞因子IL-10等具有保护作用细胞因子的分泌，进一步促进了肝脏细胞的凋亡发生。Src作为一个癌基因蛋白起初发现于Rous肉瘤逆转录病毒，随后发现在细胞中普遍存。Src在细胞存活、死亡及其他复杂的细胞生命活动过程中具重要调节作用[15]。

　　综上，吴茱萸致小鼠肝毒性分子机制可能与Erk，CDK8，CK1e蛋白表达量上调及Stat3，Src蛋白表达量下调密切相关。此外，肝细胞损伤分免疫性损伤和化学性损伤，其中免疫性损伤占主要地位，但两者往往同时发生，并不是完全独立的。吴茱萸的肝脏毒性，除了直接与细胞凋亡相关的分子如CDK8以及炎症或者细胞因子相关的信号分子如Erk1/2，Stat3参与外，不排除吴茱萸代谢产物诱导的氧自由基引起肝细胞膜性结构破坏，释放大量细胞因子和炎症因子，引起炎症细胞的活化、聚集，形成免疫性损伤。是否有TNF-α以及IL-10等在肝脏损伤中起到重要作用的分子参与，需要进一步的实验验证。

　　[参考文献]

　　[1] 中国药典.一部[S].2010： 160.

　　[2] 黄伟，李晓骄阳，孙蓉.吴茱萸水提组分多次给药对小鼠肝毒性的“量-时-毒”关系研究[J].中国中药杂志，2012，37（15）：2223.

　　[3] 李莉，赵军宁，易进海，等.吴茱萸多基源、多产地毒性效应特征研究[J].中国中药杂志，2012，37（15）：2220.

　　[4] 李波，李莉，赵军宁，等.吴茱萸乙醇提取物对大鼠急性毒性及肝毒性的影响[J].中药药理与临床，2013，29（2）：120.

　　[5] 李莉，赵军宁，鄢良春，等.吴茱萸水提取物对大鼠长期毒性试验[J].中药药理与临床，2013，29 （2）：93.

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