摘 要:对采自天津5个区县的255份番茄样品进行了双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)检测。检测结果表明,在这255份样品中,至少217份感染了所检测病毒,其中,感染番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus, ToMV)、蚕豆萎蔫病毒1、2号(Broad bean wilt virus 1、2, BBWV-1、2)、番茄斑萎病毒(TSWV)的样品分别为53.33%,53.33%,20.39%,14.12%,9.41%,0.39%。在检测呈阳性的217份样品中病毒单独侵染率为32.15%,复合侵染率为52.94%,这些数据表明在番茄上病毒复合侵染现象相当严重,其中受2种病毒复合侵染率高达40.39%,而受3种病毒复合侵染率达12.55%。 关键词:番茄病毒病;发病情况;ELISA 检测 中图分类号:S436.412 文献标识码:A DOI 编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2014.12.001 番茄是一种具有高经济价值、适于广泛栽培的作物,由于耕作栽培制度、品种变化等因素的影响,番茄的种植及病虫害防治中仍存在着许多问题,尤其是难于防治的病毒病。该病在我国南北种植区发生普遍,危害严重[1]。天津地区番茄病毒病的发生程度日趋严重,在一般年份其田间发病率均在25%以上,而病毒病流行年份部分地块发病率可达100%,番茄病毒病不仅造成夏秋季番茄种植面积严重下降,同时极大地降低了番茄产量和品质,已成为威胁夏秋季番茄生产的首要病害。目前国际上已报道的为害番茄的病毒达30余种[2],我国先后检测出13种病毒[3-7],以往研究明确了天津地区番茄病毒主要毒源种类为TMV(烟草花叶病毒)、CMV(黄瓜花叶病毒)和TYLCV(番茄黄花曲叶病毒)[7-8]。 为了解天津地区番茄上的病毒种类及其在番茄上的危害情况,为开展番茄病毒病的防治提供科学依据,笔者利用DAS-ELISA 技术对采自天津5个区县种植区的番茄病毒病样品,进行了针对6种茄果类蔬菜常见病毒的血清学检测,利用PCR技术扩增TYLCV番茄分离物CP蛋白基因,并进行了序列变异性分析。 1 材料和方法 1.1 样品采集 2013年4—12月在天津市武清、西青、静海、宁河、北辰5个区县蔬菜田调查发病情况,采集典型病毒病症状的番茄叶片、嫩梢或茎秆样品,取样时对所采集的番茄样品进行统一编号、照相、症状记载,将所采集的植物样品分别装入标记自封袋(20 cm×25 cm)中,放入-20 ℃的冰箱中冷冻保存备用。 1.2 准备样品 样品采用石英砂、研钵进行研磨,研磨后将得到的汁液用提取缓冲液1∶10稀释,4 000 r·min-1离心5 min,取上清液备用。 1.3 标准抗原及抗体 番茄TYLCV、CMV、TMV、ToMV、BBWV-1、BBWV-2、TSWV的酶免疫试剂盒购自AC diagnostics公司,包含标准抗原和碱性磷酸酶标记的兔多克隆抗体。 1.4 计算结果 采用酶联免疫检测仪ELx800测定405 nm的光吸收值(OD),记录检测结果。阳性判断标准(P/N):(检测样品OD405/阴性对照OD405) ≥2.00为阳性。 |