软腐菌识别侵染魔芋根部影响因子的研究(2)

　　1.2.2 不同温度条件下软腐菌在魔芋根表吸附量和根部侵入量测定取配好的浓度为6×107个/mL细菌悬浮液50 mL装入250 mL培养瓶中，分别置于15、20、25、30、35℃的光照培养箱内，待菌悬液的温度与培养箱内温度一致后，将魔芋苗放入其中，根部完全浸没到悬浮液中，每组处理3棵魔芋苗，在浸根接种后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h分别剪取幼根，测定不同温度条件下软腐菌根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.3 不同pH条件下软腐菌在魔芋根表吸附量和根部侵入量测定用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH将无菌水pH调节为5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，分别配制成浓度为6×107个/mL的细菌悬浮液，然后取50 mL相应值的细菌悬浮液放入250 mL培养瓶中，将魔芋苗放入其中，根部完全浸没到悬浮液中，每组处理3棵魔芋苗，置于30 ℃的光照培养箱内，在浸根接种后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h分别剪取幼根，测定不同pH条件下软腐菌根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.4 不同接种浓度下软腐菌在魔芋根表吸附量和根部侵入量测定用无菌水分别配制浓度为6×104、6×105、6×106、6×107、6×108个/mL的细菌悬浮液，取50 mL相应值的细菌悬浮液放入250 mL培养瓶中，将魔芋苗放入其中，根部完全浸没到悬浮液中，每个处理3棵魔芋苗，置于30 ℃的光照培养箱内，在浸根接种后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h分别剪取幼根，测定不同接种浓度条件下软腐菌根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.5 LPS和EPS的吸附和抑制试验取6×108个/mL浓度细菌悬浮液1 mL加入1 000 mL NA液体培养基，在30 ℃，200 r/min条件下培养18 h，按Baker 等的酚水法提取LPS[5]。按Husain酒精沉淀法提取EPS[6]。参照董汉松等[7]的方法，用LPS和EPS分别对幼苗进行浸根处理，以无菌水作为对照，30 ℃条件下，30 min 后用pH 7.0细菌悬浮液（6×108个/mL）接种，以不做预处理的接种为对照。30 ℃ 测定幼苗接种1 h 和6 h 后软腐菌对根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.6 EPS和LPS对菌体的吸附和抑制试验无EPS和无EPS及LPS菌体悬浮液制备参考董汉松等[7]的方法。分别用浓度为6×108个/mL无EPS及无EPS及LPS的细菌悬浮液处理魔芋苗，以未处理6×108个/mL的细菌悬浮液处理魔芋苗。30 ℃ 测定幼苗接种1 h 和6 h 后软腐菌对根表吸附量和根部侵入量。设3次重复，结果取平均值，利用Excel进行数据处理。

　　1.2.7 根表吸附量和根部侵入量测定方法及根表吸附量测定[8] 每株每次剪取1条幼根，距离幼根末端约2 cm，将截取的根尖浸入5 mL无菌水中，涤荡1 min后，取出根尖，用灭菌滤纸吸干外表水分，称质量，用稀释平板法统计悬浮液中的细菌数量，即为软腐菌的根表吸附量。根部侵入量测定[8]：将称重后的根尖放入5 mL无菌水中，磨碎，用平板计数法计数悬浮液中的细菌数量，即为软腐菌的根部侵入量，计算公式为：吸附或侵入量（个/g鲜质量）=细菌浓度（个/mL）×分离用水量（mL）/根质量（g鲜质量）。

　　2 结果与分析

　　2.1 温度对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响

　　由图1和图2可知，在整个温度梯度中，随温度升高，根部吸附侵入量逐渐增高，当温度升至30 ℃时，根部吸附和侵入量最高，35 ℃时根部吸附和侵入量逐渐降低，这可能因为软腐菌的最适生长温度为28 ℃，高温抑制了病菌的生长，所以根部吸附侵入量降低。在所有温度梯度范围内，菌株的吸附侵入量都随时间的延长呈上升趋势。方差分析表明，不同温度下软腐菌在魔芋根部吸附侵入有极显著差异（P<0.01）。

　　2.2 pH对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响

　　从图3和图4可以看出，pH 6.0时，魔芋苗根部吸附侵入软腐病病量均最高，这可能是因为魔芋软腐菌最适生长pH为6.0～6.5。对在不同pH条件下的魔芋苗根部吸附侵入软腐病病量进行方差分析，结果表明，不同pH值条件下菌株在魔芋根部吸附侵入软腐病量都具有极显著影响（P=0.0001<0.01）。

　　2.3 不同接种浓度对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响

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